QUY TRÌNH PHÁT HIỆN VI SINH VẬT GÂY BỆNH BẰNG CÔNG NGHỆ LAMP

+ Các phương pháp phát hiện vi sinh vật gây bệnh

 Quy trình kiểm tra vi sinh vật gây bệnh tổng quan

Trong lĩnh vực kiểm tra vi sinh vật gây bệnh như Salmonella, listeria, cronobacter, campylobacter, E.coli O157,...., hiện nay, có rất nhiều phương pháp đang được sử dụng, như đổ đĩa thạch, PCR, real-time PCR, ... . Tuy nhiên, với những ưu điểm: kiểm tra nhanh chóng, chính xác, hiệu quả, ... thì phương pháp dựa trên sự khuếch đại phân tự - PCR đang là phương pháp vàng để kiểm nghiệm. Ngày nay với sự phát triển không ngừng của khoa học, phương pháp PCR đang được vận dụng và cải tiến không ngừng, để hạn chế những nhược điểm vốn có của nó như quy trình khá phức tạp, bị ảnh hưởng bởi nền mẫu trong quá trình khuếch đại, phương pháp LAMP (Loop-Mediated Isothermal DNA Amplification) là một minh chứng cho những tiến bộ đó. 

* Nguyên lý hoạt động của LAMP

• Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) được thúc đẩy bởi Bst DNA polymerase mạnh mẽ, sử dụng sáu loại mồi khác nhau để có độ đặc hiệu cao.
• Exponential generation of Pyrophosphate (PPi) được chuyển thành Adenosine Triphosphate (ATP) bởi ATP-Sulfurylase.
• Luciferase  sử dụng ATP để tạo ra ánh sáng, cung cấp khả năng phát hiện trong thời gian thực chỉ trong vòng 15 phút.

Dòng thời gian về sự hình thành các phương pháp kiểm vi sinh vật gây bệnh

+ So sánh phương pháp PCR truyền thống và LAMP

 Quy trình khuếch đại đoạn DNA theo PCR truyền thống và vòng lặp (LAMP)

PCR truyền thống

• Yêu cầu một máy luân nhiệt có khả năng xoay vòng qua các nhiệt độ khác nhau cho việc khuếch đại DNA
• Phản ứng được kết hợp với một reporter (đình kèm tín hiệu huỳnh quang) để phát hiện trong thời gian thực
• Các thành phần mẫu thực phẩm có thể cản trở quá trình khuếch đại DNA

LAMP

• Khuếch đại đẳng nhiệt
• Phản ứng được kết hợp với một phóng viên (tức là huỳnh quang hoặc phát quang sinh học) để phát hiện trong thời gian thực
• Bst DNA polymerase với hoạt động dịch chuyển sợi
• Khuếch đại DNA liên tục
• Khuếch đại mạnh mẽ, hiệu quả, nhạy và đặc hiệu
• Ít bị hạn chế hơn Taq polymerase

Bảng so sánh phương pháp PCR truyền thống và LAMP

+ Quy trình phát hiện vi sinh vật gây bệnh bằng phương pháp LAMP

Ứng dụng công nghệ LAMP và hệ thống sinh học phân tử phát hiện hiện vi sinh vật gây bệnh MDS 3M, giúp quy trình trở nên đơn giản, nhanh chóng trong vòng 26 giờ. 

 Quy trình kiểm vi sinh vật gây bệnh trên máy MDS 3M

+ Cách đọc kết quả trên máy MDS 3M

(+) Các mẫu dương tính tạo ra một đỉnh (tăng nhanh sau đó là giảm công suất ánh sáng) khi chuỗi gen mục tiêu được khuếch đại.

(-) Mẫu âm tính làm không tạo ra điểm đỉnh, đồ thị dường như là 1 đường thẳng.

+ Tiêu chuẩn của 3M™ Molecular Detection System ứng dụng công nghệ LAMP

Bảng tiêu chuẩn AOAC các chỉ tiêu vi sinh vật gây bệnh theo phương pháp MDS

Quý khách cần thêm về thông tin, vui lòng liên hệ hotline: 0914 651 297